Лептоспироз ПЦР

Описание исследования

Цель исследования: выявление РНК патогенных спирохет Leptospira interrogans,L.alexanderi L.borgpetersenii, L.kirschneri, L.noguchii, L.santarosai. L. Weiliiв в патологическом материале методом полимеразной цепной реакции

Предназначено для диагностики у:
- собак
- кошек
- лошадей
- МРС, КРС
- свиней

Опасность для человеческого здоровья:
Зооноз. Зараженные собаки являются резервуаром инфекции и выделяют их в окружающую среду. Заражение может происходить при несоблюдении правил гигиены через инфицированную воду, мочу

Спецификация .
Лептоспироз(Leptospirosis) – инфекционная природноочаговая болезнь многих видов животных (болеют свиньи, крупный и мелкий рогатый скот, лошади, собаки, верблюды, пушные звери, мелкие дикие млекопитающие, человек), характеризующаяся кратковременной лихорадкой, анемией, желтухой, гемоглобинурией, некрозами слизистых оболочек и кожи, атонией желудочно-кишечного тракта, абортами, рождением нежизнеспособного потомсства. Инкубационный период от 3-х до 7-ми дней в зависимости от серовара и особенностей специфического иммунитета. Обнаружение лептоспир по крови возможно только в первые 5-7 дней после появления клинических признаков. Выделение лептоспир с мочой начинается на 7-10 день после проявления клинических симптомов и продолжается месяцами. Лептоспиры могут вызывать у собак хроническое поражение почек спустя месяцы и годы после острого повреждения почек.

Механизмы патогенеза лептоспироза у собак:
   Лептоспиры проникают в организм собаки через слизистую оболочку или поврежденную кожу. В воротах инфекции обычно не развивается специфических поражений. Из них возбудитель в последующие 4-11дн проникает в кровь, вызывая септицемию. Клинически лептоспиремия проявляется лихорадкой, кратковременной гемолитической анемией, лейкоцитозом, гемоглобинурией и альбуминурией.
   Продолжительность бактериемии благодаря усиливающемуся иммунному ответу обычно составляет 4-5 дн. Элиминация бактерий из крови сопровождается прекращением лихорадки. Во время септицемии ЛС разносятся кровью по всему организму, проявляя при этом (в зависимости от серовара) более или менее выраженный тропизм к печени, почкам, плаценте и плодам.
   Благодаря высокой подвижности и небольшой толщине они избегают фагоцитоза ретикулоэндотелиальными клетками печени и проникают через эндотелиальную выстилку синусоидов, достигая пространства между клетками паренхимы (70). В печени эти сприрохеты активно размножаются, вызывая паренхиматозное воспаление с последующим включением основных патогенетических механизмов гепатита, в т.ч. характерной для этой формы лептоспироза желтухи. Поражения печени вызваны механическим повреждением гепатоцитов ЛС, а также действием их токсинов. Помимо нарушения динамики оттока из воспаленной печени желчи определенную роль в патогенезе желтухи играет диссеминированный геморрагический процесс, происходящий в результате воздействия на эритроциты гемолизинов возбудителя.
Пути заражения
   Заражение собак происходит в основном горизонтальным путем - через пищеварительный тракт при приеме корма и воды, контаминированных ЛС, аэрозольно и, реже половым путем. Возможно также и вертикальное распространение инфекции от инфицированной суки - через плаценту плодам и через молоко подсосным щенкам. ЛС могут проникать в организм не только через слизистые оболочки, но и через поврежденную кожу.
ептоспироз собак может протекать безсимптомно или проявляться клинически в желтушной или безжелтушной формах. Их тяжесть зависит от возраста и иммунного статуса инфицированного животного, вирулентности вызвашего инфекцию серовара ЛС, заражающей дозы и пути заражения.
Симптомы
   При типичном течении лептоспироз имеет 2-фазный характер: вначале развивается симптоматика, связанная с бактериемией, а на второй фазе на первый план выступают клинические признаки поражения определенных органов.
   В подострых случаях собака может переболевать без появления характерной симптоматики. При таком течении инфекции у заболевшей собаки снижается аппетит, развивается субфебрильная температурная реакция (38,5-40 C), появляются мышечные боли, слабость, угнетение, иногда конъюнктивит, признаки анемии, а также клинические признаки описанных ниже желтушной или безжелтушной форм лептоспироза, но в стертом виде.
   При обеих формах болезни у щенных сук инфекция может вызвать аборт.
   При лептоспирозе у собак выявляют ряд гематологических изменений: анемию средней тяжести, лейкопению (на лептоспиремийной стадии инфекции), которая сменяется лейкоцитозом со сдвигом влево, тромбоцитопению, гипербиллирубинемию (3-50 мг/дцл), гиперазотемию, гиперкреатинемию (3-20 мг/дцл), гиперфосфатемию, а также повышение концентрации амилазы и липазы. Увеличение активности в сыворотке крови печеночных ферментов (аланинтрансферазы и аспартаттрансферазы ), а также при тяжелом поражении почек и/или печени - повышение концентрации в крови азота мочевины и креатинина свыше 25 и 2 мг/дцл.
Вакцина от лептоспироза относится к необязательным вакцинациям. Кратность ревакцинации 1 год.

Лептоспироз у кошек:
Явная клиническая картина клинического лептоспироза у кошек встречаются РЕДКО.
В организм кошки лептоспиры проникают с грязной водой, пищей, грызунами. Именно грызуны являются очень частыми переносчиками этого заболевания в природе. Основной мерой профилактики лептоспироза у кошек, это борьба с грызунами.
Скрытый период заболевания у кошек длится от двух до десяти суток. Заболевание может проходить в острой, подострой и хронической форме. Под действием возбудителя нарушается работа почек, органов пищеварения, сердца и сосудов. В первые дни заболевания у животного резко увеличивается температура тела, кошка лежит, отказывается от еды, может наблюдаться рвота, лапы подрагивают. Далее на слизистой оболочке рта образуются покраснения, перерастающие в язвы, из ротовой полости исходит неприятный запах, язвы часто кровоточат. Кошка теряет массу, слабеет, у нее хуже работает сердце. Если заболевание протекает не в острой форме, то все симптомы заболевания появляются постепенно, кожные покровы чаще всего не затрагиваются. Изменения в работе органов пищеварения наблюдаются время от времени. Если у домашней кошки появляются симптомы, напоминающие лептоспироз, ее следует обязательно показать ветеринару. Следует всячески предотвращать контакт домашней кошки с животными, зараженными данным заболеванием.

Подготовка к исследованию

Требования к пробе: - Для исследования используют: 1. моча, после 7-10 дней от начала проявления клинических симптомов возможно исследование мочи на лептоспироз методом ПЦР. 2. паренхиматозные органы с очагами поражения (мозг, легкие, почки (обе)), 3. абортированный плод. 4. Кровь с К3ЭДТА В первые 5-7 дней заболевания на фоне лихорадки берется Кровь животного с К3ЭДТА. В остальных случаях, при настоянии и ответственности врача или владельца, с внесением соответствующей записи в комментарии заявки. После 5-7 дней заболевания Кровь животного с К3ЭДТА настоятельно рекомендуется исследовать методом ИФА на наличие АТ к лептоспирозу. - кровь с гепарином не подходит для исследований методом ПЦР! - смешанные пробы запрещены в связи с особенностями технологии проведения анализа! Хранение образцов: Материал для анализов доставляется в лабораторию в день взятия или на следующий день, сохраняя их при +2-+8⁰С. Допускается хранение секционного материала (ткани органов) или мочи в течение 1 мес при температуре не выше -16⁰С.

Требование к биоматериалу

ВАЖНО! 1. Вакцинация инактивированными вакцинами клинически здоровых собак не приводит, как правило, к ложноположительным реакциям. 2. Субклинически инфицированные собаки могут выделять с мочой лептоспиры, значение положительного результата в этиологии заболевания в этом случае определяет ветеринарный врач. ВАЖНО! 1. Чтобы избежать ложноположительных результатов необходимо выдержать 2-3 недели после лечения перед сдачей анализа. 2. Положительный результат при отсутствии клинической картины заболевания может означать бактерио-/вирусоносительство.